大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。而检测食品中大肠菌群的方法中,国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准,国家标准的三步九管法,即乳糖发酵试验、分离培养、证实试验。
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,即:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
1.乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
2.分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18-24h,观察菌落形态。
3.证实试验:挑取平板上的可疑菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h,观察产气情况。
在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。
在试验过程中,会用到高压灭菌器来进行灭菌,九管法灭菌时,大肠菌在高温下会产生气泡,如果用的是CT90B高压灭菌器,可以通过进入界面菜单,调整在升温过程中的排气时间,可以有效的排走残留在培养基中的气泡。
高压灭菌器拥有微电脑芯片智能控制系统,实时监测灭菌腔内的温度、压力,只有在安全的温度和压力下才能开启灭菌腔盖,确保使用人员的安全。同时实现了灭菌过程的全自动控制,而且可以便捷地进行维护、查询、校验、记录,及将来的扩展升级。能够实时打印灭菌温度、压力、时间等各种状态下数据,进行灭菌状态监测。并且灭菌结束后自动干燥,干燥彻底,达到CE效果。可以提供0.2μm空气过滤器,灭菌结束,让外部空气经过滤后进入腔体,实现无菌状态下快速烘干。采用自动进水(仅CT-B CT-C型号提供),通过水箱,可对腔体自动补水,免除频繁加水的不便,配备的水位传感器,可在缺水时自动停机并报警。系统自动监测冷空气排放情况,确保纯蒸汽的灭菌环境,保证最佳灭菌效果。